桑葉探針法PCR鑒定試劑盒説明書

本產品僅供科研，不得做其它用途

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本產品就是根據PCR原理專門開發的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

3. 產品精心優化且特異性高，引物是根據高度保守區設計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發生交叉反應。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產品足夠50次20μL體系的PCR反應。

6. 本產品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7. 本產品只能用于科研

桑葉探針法PCR鑒定試劑盒説明書樣品的制備　

【試劑盒組成】

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】 ABI7500、羅氏 96/480、安捷倫、伯樂、國產博日、宏石等各種熒光定量 PCR 儀。

定義和原理

PCR 探針法試劑盒是基于聚合酶鏈式反應（PCR）技術，結合探針來檢測特定核酸序列的工具包。其原理是在常規 PCR 基礎上，加入了一段能與目標核酸序列特異性結合的熒光標記探針。在 PCR 擴增過程中，當探針與目標序列結合后，通過熒光信號的變化來實時監測 PCR 產物的擴增情況。

主要組成成分

引物：是一小段單鏈 DNA 或 RNA，與目標核酸序列兩端互補，引導 DNA 聚合酶進行 DNA 合成，決定了 PCR 擴增的特異性和范圍。

探針：帶有熒光基團和淬滅基團，在完整狀態下，淬滅基團抑制熒光基團的熒光信號。當探針與目標序列結合并被核酸酶切割后，熒光基團和淬滅基團分離，從而產生熒光信號。

DNA 聚合酶：負責在引物的引導下，將脫氧核苷酸（dNTPs）逐個添加到引物的 3' 端，合成新的 DNA 鏈。

dNTPs：即脫氧核苷三磷酸，包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP，是合成 DNA 的原料。

反應緩沖液：為 PCR 反應提供適宜的 pH 值、離子強度等環境條件，保證 DNA 聚合酶的活性和反應的順利進行。

常見類型

TaqMan 探針法試劑盒：TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，其 5' 端標記熒光報告基團，3' 端標記淬滅基團。在 PCR 擴增過程中，Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性會將與目標序列結合的探針切割，使熒光報告基團和淬滅基團分離，熒光信號增強。通過檢測熒光信號的強度，可以實時監測 PCR 產物的擴增情況。

分子信標探針法試劑盒：分子信標是一種具有發夾結構的寡核苷酸探針，其兩端分別標記熒光報告基團和淬滅基團。在沒有目標序列存在時，分子信標呈發夾結構，熒光報告基團和淬滅基團靠近，熒光信號被淬滅。當存在目標序列時，分子信標與目標序列雜交，發夾結構打開，熒光報告基團和淬滅基團分離，產生熒光信號。

優點

高特異性：探針與目標序列的特異性結合，大大提高了檢測的準確性，能夠有效區分相似的核酸序列。

高靈敏度：可以檢測到低拷貝數的目標核酸，適合微量樣品的檢測。

實時監測：能夠實時監測 PCR 擴增過程，準確地測定起始模板的拷貝數。

操作簡便：試劑盒提供了預混好的反應體系，減少了操作步驟和誤差。

【注意事項】

1.使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關部分頒布的有關基因擴增檢驗實驗室管理規范進行管理；

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理；

3.各區域物品均為專用，不得交叉使用，以免污染；檢測結束后，應立即對工作臺清潔；

4.吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡；上 PCR 儀前，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發造成結果不準確；

5.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心；

6.試劑盒內所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放；

7.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記；

8.檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內，檢測結束的PCR 反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄；工作臺及各種實驗用品應定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒；

9.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用；并在有效期內使用。

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