TtDnaG2 Primase試劑

TtDnaG2 Primase試劑Thermoanaerobacter tengcongensis，具有依賴于DNA的RNA聚合酶活性的引發(fā)酶（Primase

）。在DNA的復(fù)制中它可合成RNA引物，進(jìn)而引導(dǎo)先導(dǎo)鏈DNA的合成。與野生型TtDnaG 相比，修飾后的TtDnaG2蛋白去除

了其序列特異性識(shí)別特性，使得該蛋白在合成RNA Primer過(guò)程中對(duì)模板無(wú)偏好性。該蛋白37~85℃之間都有活性，

最佳反應(yīng)溫度為70℃，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道其具有100nt以上的RNA Primer合成能力。

組分

組分名稱50 μg

TtDnaG2 Primase (1 μg/μl)50 μl

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

Storage Buffer

20mM Tris-HCl，pH7.5

200mM NaCl

5mM DTT

50%甘油

TtDnaG2 Primase試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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