3173 DNA Polymerase(5U/ul))試劑

3173 DNA Polymerase(5U/ul))試劑 聚合酶是Taq DNA聚合酶中的一種，其經(jīng)過基因工程改造的Taq (R660D/F667Y) DNA聚合酶基因。

該DNA聚合酶具有較強的ddNTP的滲入能力，因此其適用于終止法DNA測序或SNP分析。

組分

組分名稱數(shù)量

Taq FS DNA Polymerase (5 U/μl)100 μl

10×Taq FS PCR Buffer1 ml×2

單位定義

一個活力單位即在在74°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用方法

按下表配制反應(yīng)液:

Taq FS DNA Polymerase (5 U/μl)               0.25 μl

10×Taq FS PCR Buffer                                  10 μl

dNTP Mixture (2.5 mM each)                         2 μl

*1模板DNA                                                   *X μl

引物F（10 μM）                                            2 μl

引物R（10 μM）                                            2 μl

ddH2O                                                Up to 50 μl

*1模板DNA用量參數(shù)(50 μl反應(yīng)體系):Genomic DNA 100-1000 ng ; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μlPCR擴增循環(huán)參數(shù)

循環(huán)數(shù)溫度時間

1st Cycle95°C2min

25-35 Cycles95°C20s

Tm20s

72°C1kb/1min

Last Cycle72°C2min

3173 DNA Polymerase(5U/ul))試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。