檢測(cè)試劑盒(福林微板法)

Bromelain)簡(jiǎn)稱菠蘿酶，亦稱鳳梨酶、鳳梨酵素等，是存在于菠蘿植株中的蛋白水解酶，可從菠蘿果莖、葉、皮提

取出來(lái)，經(jīng)精制、提純、濃縮、酶固定化、冷凍干燥而得到，菠蘿蛋白已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)，利用吸附力、離

子鍵、共價(jià)鍵等不同的聯(lián)結(jié)方式，將酶與不溶性載體聯(lián)結(jié)制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于儲(chǔ)存運(yùn)輸。

檢測(cè)試劑盒(福林微板法)檢測(cè)原理是通過(guò)菠蘿蛋白催化底物酪蛋白水解生成酪氨，酪氨含有酚羥基，

可與福林試劑發(fā)生福林反應(yīng)，即福林試劑在堿性條件下容易定量的被酚類化合物還原，生成鎢藍(lán)和鉬藍(lán)的混合物呈現(xiàn)不同深淺的

藍(lán)色，于酶標(biāo)儀680nm處檢測(cè)吸光度，吸光度的大小與酪氨含量的多少有關(guān)，吸光度大說(shuō)明酪氨含量高，也就是說(shuō)菠蘿蛋白

分解的酪蛋白多，酶活性高，主要用于檢測(cè)植物組織尤其是菠蘿勻漿液中菠蘿蛋白的活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，

不適用于臨床診斷或其他用途。

 操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè)。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對(duì)照孔測(cè)定孔

蒸餾水150100

待測(cè)樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定

孔的吸光度。

注意事項(xiàng)∶

1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測(cè)，亦可-20°℃保存。

3、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。

4、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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