還原糖檢測試劑盒斐林比色法

斐林試劑(Fehling's Reagent)又稱菲林試劑或裴林試劑，是德國化學(xué)家Hermann von Fehling 1849年所發(fā)明，

斐林試劑與班氏試劑(Benedict's Reagent)相似，均是用來檢測還原糖的存在，其原理是與可溶性的還原性糖(葡萄糖、

果糖和麥芽糖)在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。

還原糖檢測試劑盒斐林比色法主要由酒石酸鈉鉀、硫酸銅等組成，其測定原理是還原糖具有醛基和酮基，

在堿性溶液中煮沸，能把斐林試劑中的Cu2+還原成Cu+，使藍(lán)色的斐林試劑脫色，脫色程度與溶液中還原糖含量成正比

，在590nm下可用比色法測定吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品中還原糖的含量，主要用于含淀粉食品、

碳酸飲料、肉制品、蜜餞等食品和植物等樣品中還原糖的定量檢測；總糖的含量也可以測定，但需要提前水解后才能檢測

，也可用于還原糖的定性試驗(yàn)。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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