HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑該制品為全體系凍干微球制品，包含了 HotStart

Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶、Helicaser、dNTP、Mg2+、反

應(yīng)緩沖、L-HNB 變色指示劑(Leuco-HNB, 隱色 HNB 染

料)，其它穩(wěn)定劑。

Bst4.2 具有以下性能：（1）Bst 4.2 全系包含熱啟動

Aptamer，該配體確保酶在<30℃時，酶活封閉效率>95%,

在>60℃時 1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立反

應(yīng)體系，并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增；（2）反

應(yīng)溫度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高

擴(kuò)增特異性，并使得粗樣品核酸釋放更加充分；（3）全系

包含 Helicaser，因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情況下

進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的引物

用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增，并使得擴(kuò)增

均一性大幅提升。

制品中的 L-HNB 染料在反應(yīng)起始前與 Mg2+結(jié)合產(chǎn)

生深紫羅蘭色，隨著 LAMP 反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)生的 PPi（無

機(jī)焦磷酸鹽）結(jié)合體系中的 Mg2+，使得 L-HNB 顯示出

淡綠色。

(L-HNB-Mg2+復(fù)合物) -> (PPi-Mg2+)+ (L-HNB)

 深紫羅蘭色 淡綠色

名 稱 100T

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 100 個

儲存：-20℃干燥密封保存 24 個月；室溫（25℃）密封保

存 12 個月。避免受潮。

特殊說明：

（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時

的推薦反應(yīng)溫度為 65-70℃，最佳反應(yīng)溫度為 70℃。因此

其可替代 HaiGene 的 Bst4.0 系列，用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP

的擴(kuò)增。

（2） 由于 Helicaser 的反應(yīng)溫度為 70℃，因此在進(jìn)行

eLAMP 擴(kuò)增時，反應(yīng)溫度為 70℃。

（3）制品中包含高濃度的鹽組分，使用時做好個人防護(hù)，

防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接

觸或吸入，請用大量的清水沖洗。

（4）防止氣溶膠污染，盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。

1. 標(biāo)準(zhǔn) LAMP 和 eLAMP 擴(kuò)增的區(qū)別

本試劑既可以用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增，也可以用于 eLAMP

擴(kuò)增。

1.1 10x 標(biāo)準(zhǔn) LAMP Primer Mix

FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each

1.2 10xeLAMP Primer Mix

FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each

注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，

為 Bst4.2 系列專用的使用策略，對于大多數(shù)引物組，在

Helicaser 的加持下，擴(kuò)增速度幾乎不受影響。如引物擴(kuò)

增效率低，可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16 μM。

1.3 擴(kuò)增溫度不同

標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增 eLAMP 擴(kuò)增

65-70°C 均可 70°C 反應(yīng)

2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 1 個

10x Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

反應(yīng)體系配好后，置于 65-70°C 反應(yīng) 20~30min，反應(yīng)完

畢后觀察顏色，紫色為陰性，綠色為陽性擴(kuò)增。

注意事項(xiàng)：

（1）本制品在 1x 濃度情況下，對如下試劑的耐受度，

Tris-HCl（pH8.0）≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%

≦1%； EDTA(pH8.0) ≦20 μM； 肝素≦0.5 IU/ml。

（2）L-HNB 是還原狀態(tài)下的染料，任何強(qiáng)氧化劑（H2O2、

次氯酸鈉等）均會破壞 L-HNB 的結(jié)構(gòu)，從而直接導(dǎo)致試

劑變?yōu)樯钏{(lán)綠色。

恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

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