HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)試劑

HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干)試劑為濃度 3.125x 的濃縮

試劑，包含了 Helicaser、dNTP、Mg

2+、反應(yīng)緩沖鹽、凍

干賦形劑和穩(wěn)定劑。HotStart Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶為

單獨(dú)的組分。本品針對(duì)于具有凍干經(jīng)驗(yàn)的研究者，直接進(jìn)

行后續(xù)凍干，無需再加入任何其它輔料。

 Bst4.2 具有以下性能：（1）Bst 4.2 全系包含熱啟動(dòng)

Aptamer，該配體確保酶在<30℃時(shí)，酶活封閉效率>95%,

在>60℃時(shí) 1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立

反應(yīng)體系，并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增；（2）

反應(yīng)溫度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提

高擴(kuò)增特異性，并使得粗樣品核酸釋放更加充分；（3）全

系包含 Helicaser，因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情

況下進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的

引物用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增，并使得

擴(kuò)增均一性大幅提升。

本品為多用途的試劑，適用于 LAMP 進(jìn)行 Molecular 

Beacon 探針、DP-LAMP 探針、試紙條等檢測(cè)。

名 稱 200T

3.125xBst4.2 Basic Mix(可凍干) 1.6 ml

HotStart Bst 4.2 (16U/μl) 100 μl

儲(chǔ)存：長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃以下（18 個(gè)月有效）；制品反復(fù)凍融

10 次不影響性能，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；制品由于含有高濃度的糖

組分，-20℃保存的制品，在融化時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶物。此時(shí)

3.125xBst4.2 Basic Mix 可在 37℃進(jìn)行融化，而 Bst4.2 酶制

品在 30℃的溫度下融化，過高的溫度可能會(huì)導(dǎo)致熱啟動(dòng)性能下降。

一經(jīng)融化推薦置于 2-8℃保存，在此條件下制品穩(wěn)定儲(chǔ)存 1 個(gè)月。

特殊說明：

（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時(shí)的推薦

反應(yīng)溫度為 70℃，最佳反應(yīng)溫度為 70℃。

（2） 制品中包含高濃度的鹽組分，使用時(shí)做好個(gè)人防護(hù)，防止制

品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接觸或吸入，請(qǐng)用

大量的清水沖洗。

（3）防止氣溶膠污染，盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。

1. 10xLAMP Primer Mix 的配制

標(biāo)準(zhǔn) LAMP eLAMP

FIP/BIP 16 µM each 8~16 µM each

LF/LB 4~8 µM each 4~8 µM each

F3/B3 2 µM each 非必須

注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，

為 Bst4.2-3.2 系列專用的使用策略，對(duì)于大多數(shù)引物組，

在 Helicaser 的加持下，擴(kuò)增速度幾乎不受影響。

2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系

3.125xBst4.2 Basic Mix 8 μl

10x Primer Mix 2.5 μl

HotStart Bst 4.2(16U/μl) 0.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

反應(yīng)體系配好后，置于 70°C 反應(yīng) 20~40min。

3. 試劑的凍干反應(yīng)（僅限專業(yè)人員）

本試劑可供具有凍干經(jīng)驗(yàn)的人員直接進(jìn)行后續(xù)凍干，試劑的配方對(duì)

凍干條件不苛刻。但對(duì)于不同的用戶來講，由于凍干形式、凍干體

積、上機(jī)量、凍干容器、凍干磨具等因素存在差異，以下程序僅供

參考。進(jìn)一步的程序優(yōu)化均需根據(jù)具體情況自行調(diào)整。對(duì)于非專業(yè)

人員來講，請(qǐng)直接采購 HaiGene 的凍干制品，或委托訂制。

3.125xBst4.2 Basic Mix 8 μl

25xPrimer Mix 1 μl

HotStart Bst 4.2（16U/μl） 0.5 μl

ddH2O 到總體積 9.5-10 μl

制品成型后的凍干程序：

-50℃預(yù)凍 10min； -50℃ 4-8h（真空段）；-50℃升溫到 25℃（每

小時(shí)升溫 5℃）；25℃ 2h； 25℃恒溫。

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