Bst 4.0 Basic Bead試劑

Bst 4.0 Basic Bead試劑為全體系凍干微球制品，內含恒溫擴增所用

的反應緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶

等，其不包含任何染料，使用時只需要加入引物、模板即

可進行核酸恒溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依

賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉錄），還具有依賴于

DNA 的聚合酶活性，因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使

用該制品進行恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及

RT-LAMP 擴增反應的試劑。

本制品不包含任何顯色染料，可自行搭配相關染料

或檢測手段進行 LAMP 反應，包括搭配 OG 染料管進行

橙綠變色、搭配標記 Oligo 進行試紙條檢測、搭配熒光染

料進行熒光檢測、搭配 Molecular Beacon 探針進行熒光

檢測等方法。

貨 號 名 稱 規格

A3828-02 Bst4.0 Basic Bead 100 個

儲存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個月。

使用方法：（進行 LAMP 橙綠變色擴增）：

1. 關于 OG 橙綠變色管(貨號：A3828-21)說明：橙綠變

色染料（OG Dye）以烘干的形式預加在8聯管蓋上。LAMP

反應完畢后，將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP 

的反應產物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見變色反應（陽

性），而未擴增的 EP 管為深橙色（陰性）。本試劑管常溫

長期保存。

2. 配制變色 LAMP 反應體系

在 OG 染料管（0.2ml EP）反應管中加入下述試劑

Bst4.0 Basic Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。

注意：全部試劑加入完畢后，輕彈 EP 管底部后，再蓋上 OG 橙

綠變色管（蓋上管蓋后務必不能再劇烈混合與倒置，以防止將管蓋

上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反應液中將會終止 LAMP

反應）。

3. 反應體系配好后，置于 65°C 進行反應 15~30min。（擴

增良好的引物組合，通常 20min 即可變色，一般不超過

30min）。

4. 觀察結果：反應結束后，從加熱裝置中將反應管取出，

室溫 2min，使整個反應管冷卻下來。再次用力將反應管

蓋壓緊，以防止液體泄露。將反應 EP 管倒置，并手腕輕

甩，反應液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料，靜置 1min（中

間可輕彈 1-2 次，以加速溶解 OG 染料）。再將 EP 反應

管正置，并輕甩反應液到 EP 管底部，此時擴增樣品將變

為鮮艷肉眼可見綠色，而陰性未發生擴增的管將為深橙

色。

注意：（1）觀察結果時，盡可能不要與配制反應空間共用，

以防止污染操作臺。（2）盡管 HaiGene 選取的為高密封

性的 EP 管，但也時有 EP 管發生液體泄露。在反應管倒

置時，可用紙巾包裹 EP 管，一旦發生泄露，丟棄紙巾，

防止臺面污染。（3）整個操作過程，佩戴手套、口罩等個

人防護用品。

注意事項：

（1）關于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應體系后，

可加入一滴礦物油覆蓋于反應液上部，以減少氣溶膠的污

染。礦物油并不影響 OG 染料的溶解。

（2）在使用其它熒光染料時，使用濃度可自行優化，通

常來講，參考供應商提供濃度的 0.25~0.8x，過高濃度的

染料可能導致擴增失敗。

（3）本試劑不支持，濁度、pH 變色、HNB 變色反應，

請勿嘗試。

（4）關于 LAMP 成品試劑的建議， Bst 4.0 Basic Bead

凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩定狀態，可長期保

存。將擴增引物加入到 OG 橙綠變色管底部，于 70°C 烘

干，再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測試劑。

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