Bst 4.0 LS Bead(Low Salt)試劑

Bst 4.0 LS Bead(Low Salt)試劑該制品為單一組分的 Mix（2.5 倍濃度），包含了低

濃度緩沖鹽（Low Salt）、Mg

2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA

聚合酶等，使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒

溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板

的聚合酶活性（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依賴于 DNA 的聚合酶活

性，因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行恒

溫擴增。

由于 LAMP 在反應(yīng)時會產(chǎn)生大量的 H+，導致反應(yīng)體

系 pH 下降（通常由 pH8.8，下降到 7.2 以下），因此，低

緩沖鹽體系條件下，可搭配 pH 敏感染料實現(xiàn)可視化檢測

LAMP 檢測。該制品中包含低濃度 Tris（pH8.8）緩沖鹽，

在搭配 pH 敏感染料的情況下，可進行變色 LAMP 擴增。

除此外，本試劑中不含有甘油，可用于建立凍干體系。

貨 號 名 稱 規(guī)格

A3824-01 2.5xBst4.0 LowSalt Mix 1 ml

儲存：-20℃保存 1 年；-80℃保存 2 年；短期使用放置于

2-8℃，保存 1 個月。反復凍融 10 次，不影響使用。如有

白色沉淀，于 37℃水浴放置 10min 后溶解沉淀，不影響

使用。

使用實例（以 LAMP 紅黃變色擴增為例）：

1. 搭配使用紅色 pH 指示染料（貨號：A3828-23），進行

LAMP 變色反應(yīng)。

2. 配制反應(yīng)體系

2.5xBst4.0 LowSalt Mix 10 μl

10xRed pH Dye 2.5 μl

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

3. 蓋上管蓋，置于 65°C 進行反應(yīng) 20~30min。 肉眼觀

察結(jié)果，黃色為陽性，紅色為陰性。

4. 10xLAMP Primer Mix 的配制，F(xiàn)IP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。引物的稀

釋液均使用 ddH2O（pH8.0-9.0），不能使用含有 Tris 緩

沖鹽系統(tǒng)。由于該變色方法對 pH 敏感，多數(shù)情況下引物

溶解后成酸性，因此在 10x 引物中加入終濃度 1 mM

NaOH 使引物恢復到中性 pH（~8.5），注意 NaOH 需新

鮮配制，可配制成 50-100 mM 濃度使用。

其它注意事項：

（1）該試劑對影響 pH 的緩沖鹽敏感，因此模板中 Tris

鹽、NaOH 等成分對反應(yīng)有至關(guān)重要的影響。在采用核酸

純化的樣本檢測時，推薦使用 ddH2O 進行洗脫。

（2）在使用粗制樣本時建議使用 ddH2O 保存的樣本進行

檢測。在對粗制樣本進行檢測時，最佳的粗制樣本為拭孖

樣本，拭孖樣本經(jīng) ddH2O 浸泡后，可以直接使用浸泡液

作為模板進行擴增，無需核酸純化步驟。

（3）關(guān)于 DEPC 水使用的特殊說明：由于 DEPC 處理過

的 ddH2O 顯示很強的酸性，會直接導致反應(yīng)體系變?yōu)辄S

色。所以 DEPC 處理過的 H2O 必須經(jīng) NaOH 溶液調(diào)整

pH 到 8.0-9.0 后方可使用。我們推薦直接使用，水機制

備的 18.2ΩH2O，不影響 RNA 樣本的擴增。

（4）該試劑中不含有甘油組分，因此具有凍干經(jīng)驗的人

員可進行凍干試劑的開發(fā)。

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