DNAOUT大提柱式質(zhì)粒——操作、使用及效果

本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理， 再通過(guò)離心吸附柱，專一結(jié)合DNA，最后洗去雜質(zhì)，高效快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從50-100 mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)300-500     μg的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280=1.8-2.0)，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。

1. 快速、步驟少，整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。

2. 離心柱最大吸附量為500 μg，100mL高拷貝的菌液一般能得到700 μg左右的質(zhì)粒DNA，100 mL低拷貝的菌液一般能得到150-350 μg質(zhì)粒DNA。

3. 純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。

4. 產(chǎn)量高，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 μg/mL。

5. 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。

6. 價(jià)格低，比多數(shù)國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。

使用及效果

收集50-100 mL過(guò)夜培養(yǎng)飽和菌液，離心棄上清后用6 mL溶液A重懸沉淀，再與6 mL溶液B混勻，再加入8 mL溶液C，混勻，室溫靜止2分鐘，離心10分鐘， 將上清轉(zhuǎn)移到DNA純化柱中，靜置2分鐘，離心后棄收集管中的廢液，用10  mL的通用洗柱液洗滌離心柱兩次。干甩一次，將離心柱置于新的50 mL離心管（自備）中，用1 mL DNA洗脫液洗脫2-5次即得質(zhì)粒DNA。

圖注：高拷貝質(zhì)粒pWXL001從70 mL過(guò)夜培養(yǎng)菌液中提取得到。從左到右分別為第一次，第二次，第三次，第四次和第五次洗脫，每次洗脫體積均為1 mL。上樣體積為10 μL，最后在0.8%瓊脂糖凝膠中電泳后紫外觀察。使用的染料為綠如藍(lán)染料，電泳緩沖液為超快電泳液。第一次洗脫約25% 的質(zhì)粒DNA，第二次洗脫約35%的質(zhì)粒DNA；第三次洗脫約20%的質(zhì)粒DNA；第四次洗脫約10%的質(zhì)粒DNA；第五次洗脫約8%的質(zhì)粒DNA。本次實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒DNA產(chǎn)量是465.5 μg，產(chǎn)率是6.65 μg/mL(實(shí)驗(yàn)編號(hào)305095)。