T25瓶細(xì)胞處理的方法

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。 如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。

并進(jìn)行以下操作：

 1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。 

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

 3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

 4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

 5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代 

②若細(xì)胞密度較大，達(dá)到80%以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。 注：培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況。 這時(shí)請(qǐng)?jiān)谂恼蘸髮腋〉募?xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的培養(yǎng)基。（這里是針對(duì)原來(lái)培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來(lái)FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）