銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone 微板法)操作説明

銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone 微板法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

銅是人體重要的微量元素，是酶的重要組成部分如銅藍(lán)蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶、

細(xì)胞色素氧化酶等，總含量約為 90mg，有 90~95%的銅與球蛋白結(jié)合，形成銅藍(lán)蛋白，5~10%的銅

與清蛋白結(jié)合，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測(cè)方法有分光光度計(jì)、原子吸收光譜法、中

子活化分析法等。

雅吉生物銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone 微板法)檢測(cè)原理是在酸性介質(zhì)中與白蛋白結(jié)合的銅從

白蛋白中解離出來(lái)，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后銅離子與 Cuprizone 絡(luò)合，形成穩(wěn)定的藍(lán)色絡(luò)合物，通過(guò)酶

標(biāo)儀測(cè)定 620nm 處吸光度，形成的藍(lán)色與血清、血漿銅成線(xiàn)性關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品比較，根據(jù)公式計(jì)

算出銅含量，該檢測(cè)試劑盒在 62.8μmol/L 以下線(xiàn)性關(guān)系良好，特異性高，較為靈敏。該試劑

盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。 產(chǎn)品組成：

名稱(chēng) 100T Storage

試劑(A):銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml) 1ml 4℃避光

試劑(B):銅標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 5ml RT

試劑(C):CU 酸化液 15ml 4℃

試劑(D):Lea 蛋白沉淀液 25ml 4℃避光

試劑(E):Cu Assay Buffer 2x10ml 4℃

試劑(F):Cuprizone 顯色液 1.2ml 4℃避光

試劑(G):ddH2O 10ml RT

自備材料：

1、酶標(biāo)儀、96 孔板

2、1.5ml 離心管或試管

3、離心機(jī)

操作步驟(僅供參考)：

1、制備樣品∶血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，

-20℃凍存，用于 Cu 的檢測(cè)。

2、配制銅標(biāo)準(zhǔn)工作液︰取適量的銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)，按銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)∶

銅標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1:24 的比例配制銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml)，即為銅標(biāo)準(zhǔn)工作液;4℃避光

保存，3 個(gè)月有效。

3、Cu 加樣∶最好選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的干燥試管或者一次性無(wú)菌

聚乙烯 1.5ml 離心管，以及潔凈 96 孔板，如果無(wú)法達(dá)到上述要求，應(yīng)盡量避免

使用銅污染的器皿，按下表操作。

4、Cu 測(cè)定∶混勻，室溫靜置 20min，以空白調(diào)零，酶標(biāo)儀 620nm 處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)孔

和測(cè)定孔的吸光度(即為 A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 測(cè)定)。

計(jì)算:

血漿、血清銅(μmol/L)=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn)）×62.8

式中∶A 測(cè)定=測(cè)定管的吸光度

A 標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度

銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml)=銅標(biāo)準(zhǔn)(62.8μmol/L)

μg/dl=μmol/L/0.157

參考區(qū)間∶

成年健康人血清銅︰

男性∶10.99~21.98μmol/L(70~140μg/dl)

女性∶12.56~23.55μmol/L(80~150μg/dl)

注意事項(xiàng)∶

1、如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)用去離子水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用到的水，不可用普通的蒸餾水，盡量采用高純度的去離子水。

3、玻璃器材盡量用 10%的鹽酸浸泡 24h，取出后用去離子水沖洗后才可以使用。

4、試驗(yàn)中儀器、試管、注射器等盡量避免銅污染。

5、測(cè)定波長(zhǎng)可選 600~640nm，檢測(cè)結(jié)果差異不大。

6、該試劑盒呈色穩(wěn)定，顯色后在 4~20℃可穩(wěn)定 1h。

7、隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，顏色會(huì)變淺或消失，應(yīng)在 1h 內(nèi)檢測(cè)完畢。

8、Cu Assay Buffer 應(yīng)密閉保存，用完立即蓋緊蓋子，防止有效成分揮發(fā)。

9、經(jīng)典標(biāo)準(zhǔn)品采用銅標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)，如儀器精密干擾小，可以采用銅標(biāo)準(zhǔn)

(2μg/ml)，其計(jì)算公式為︰血漿、血清銅(μmol/L)=(A 測(cè)定/A 標(biāo)準(zhǔn))×31.4。

有效期∶12 個(gè)月有效﹔常溫運(yùn)輸，4C 保存。