銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)操作方法

銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)

產(chǎn)品簡介：

銅是人體重要的微量元素，是酶的重要組成部分如銅藍(lán)蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶、細(xì)胞色素氧化酶等，總含量約為90mg，有90~95%的銅與球蛋白結(jié)合，形成銅藍(lán)蛋白，5~10%的銅與清蛋白結(jié)合，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測方法有分光光度計、原子吸收光譜法、中子活化分析法等。

雅吉生物銅檢測試劑盒(Cuprizone微板法)檢測原理是在酸性介質(zhì)中與白蛋白結(jié)合的銅從白蛋白中解離出來，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后銅離子與Cuprizone絡(luò)合，形成穩(wěn)定的藍(lán)色絡(luò)合物，通過酶標(biāo)儀測定620nm處吸光度，形成的藍(lán)色與血清、血漿銅成線性關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品比較，根據(jù)公式計算出銅含量，該檢測試劑盒在62.8μmol/L以下線性關(guān)系良好，特異性高，較為靈敏。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、酶標(biāo)儀、96孔板

2、1.5ml離心管或試管

3、離心機(jī)

操作步驟(僅供參考)：

1、制備樣品∶血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于Cu的檢測。

2、配制銅標(biāo)準(zhǔn)工作液︰取適量的銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)，按銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)∶銅標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1:24的比例配制銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml)，即為銅標(biāo)準(zhǔn)工作液;4℃避光保存，3個月有效。

3、Cu加樣∶最好選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的干燥試管或者一次性無菌聚乙烯1.5ml離心管，以及潔凈96孔板，如果無法達(dá)到上述要求，應(yīng)盡量避免使用銅污染的器皿，按下表操作。

4、Cu測定∶混勻，室溫靜置20min，以空白調(diào)零，酶標(biāo)儀620nm處測定標(biāo)準(zhǔn)孔和測定孔的吸光度(即為A_{標(biāo)準(zhǔn)}和A_測定)。

計算:

血漿、血清銅(μmol/L)=(A_測定/A_{標(biāo)準(zhǔn)}）×62.8

式中∶A_測定=測定管的吸光度

A_{標(biāo)準(zhǔn)}=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度

銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml)=銅標(biāo)準(zhǔn)(62.8μmol/L)

μg/dl=μmol/L/0.157

參考區(qū)間∶

成年健康人血清銅︰

男性∶10.99~21.98μmol/L(70~140μg/dl)

女性∶12.56~23.55μmol/L(80~150μg/dl)

注意事項∶

1、如果樣品濃度過高，應(yīng)用去離子水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

2、實驗過程中用到的水，不可用普通的蒸餾水，盡量采用高純度的去離子水。

3、玻璃器材盡量用10%的鹽酸浸泡24h，取出后用去離子水沖洗后才可以使用。

4、試驗中儀器、試管、注射器等盡量避免銅污染。

5、測定波長可選600~640nm，檢測結(jié)果差異不大。

6、該試劑盒呈色穩(wěn)定，顯色后在4~20℃可穩(wěn)定1h。

7、隨著時間的延長，顏色會變淺或消失，應(yīng)在1h內(nèi)檢測完畢。

8、Cu Assay Buffer應(yīng)密閉保存，用完立即蓋緊蓋子，防止有效成分揮發(fā)。

9、經(jīng)典標(biāo)準(zhǔn)品采用銅標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)，如儀器精密干擾小，可以采用銅標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)，其計算公式為︰血漿、血清銅(μmol/L)=(A_測定/A_{標(biāo)準(zhǔn)})×31.4。

有效期∶12個月有效﹔常溫運(yùn)輸，4C保存。

注意∶由于檢測儀器和操作手法等條件的不同，參考值范圍會有波動，該值僅供參考，對于要求精確計算銅含量的，可以采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行多點(diǎn)測定;根據(jù)雅吉生物測定經(jīng)驗顯示，標(biāo)準(zhǔn)品濃度在0.5μg/ml 以下，50μg/ml 以上，標(biāo)準(zhǔn)曲線會有偏差。