如何選 ELISA 試劑盒

如何選 ELISA 試劑盒

市面上的 ELISA 試劑盒五花八門，質(zhì)量良莠不齊。如何浪里淘金，選擇既符合科研需求，又品質(zhì)上乘的 ELISA 試劑盒呢?

教你七招，快速搞定 ELISA 試劑盒的選擇！

01 查找待測(cè)樣本的蛋白濃度

通過檢索 SCI 文獻(xiàn)、Genecards、Mayocliniclabs 等，獲得目標(biāo)蛋白的表達(dá)部位及表達(dá)濃度參考值，比較 ELISA 試劑盒中給出

樣本測(cè)值與參考值是否一致。

02 明確試劑盒的應(yīng)用種屬＆檢測(cè)的樣本類型

不同廠家驗(yàn)證的樣本類型不同。除試劑盒特別說明外，一般情況下，不同種屬不能通用。常見待測(cè)樣本類型有：血清、血漿、細(xì)胞

上清、組織勻漿、細(xì)胞裂解液等。實(shí)驗(yàn)前，需要判斷試劑盒能否滿足目標(biāo)物種的目標(biāo)蛋白檢測(cè)。

03 明確試劑盒的檢測(cè)范圍

試劑盒的檢測(cè)范圍即標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍。標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍不等同于樣本濃度范圍，所以，要特別注意判斷待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)準(zhǔn)曲線

范圍內(nèi)。對(duì)于濃度很高的樣本，建議先通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索出合適的稀釋倍數(shù)后，再大量測(cè)定樣本。

04 明確試劑盒的國(guó)際質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

1 稀釋線性

一般指樣本稀釋線性，即：將樣本梯度稀釋，看各稀釋梯度濃度是否成線性；對(duì)于高濃度樣本，建議選擇 OD 值落在標(biāo)曲范圍中

部的稀釋倍數(shù)為最佳稀釋倍數(shù)。

2 回收率

評(píng)估試劑盒測(cè)量結(jié)果趨于真實(shí)值程度的指標(biāo)。一般添加標(biāo)準(zhǔn)品（重組蛋白）到天然樣本基質(zhì)內(nèi)，進(jìn)行測(cè)定。通常，線性及回收率的

范圍在 80%-120% 比較合適。

3 天然樣本檢測(cè)

確保試劑盒可以檢測(cè)天然樣本及合適的樣本類型。可根據(jù)靶蛋白性質(zhì)對(duì)天然樣本進(jìn)行選擇，例如：血清、血漿、細(xì)胞上清、尿液

、唾液和乳汁等。

4 交叉反應(yīng)

通過交叉反應(yīng)評(píng)估試劑盒的特異性。交叉反應(yīng)越小，說明試劑盒的特異性越好。

?與同家族其他蛋白或結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)。

?與其他種屬相同靶點(diǎn)蛋白的交叉反應(yīng)。

?與血清中常見因子的交叉反應(yīng)。

5干擾試驗(yàn)

判斷其他分子與抗原-抗體對(duì)之間相互作用的影響。干擾性越大，待測(cè)物測(cè)定值越不準(zhǔn)確。

?評(píng)估靶蛋白配體的干擾。

?評(píng)估靶蛋白受體的干擾。

6穩(wěn)定性

判定試劑盒在規(guī)定條件下儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)短的標(biāo)準(zhǔn)。一般通過熱加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

?將試劑盒在 37℃ 條件下放置 7 天，與 4℃ 條件下放置的相同產(chǎn)品進(jìn)行比較。

?各項(xiàng)性能檢測(cè)結(jié)果的偏差均應(yīng) ＜15%。

7 精密度

試劑盒重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，誤差大小的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。通常用 CV 表示。一般情況下，批間、批內(nèi)變異系數(shù)（CV）均應(yīng)＜15%。

雅吉生物是一家生物企業(yè)主營(yíng)ATCC細(xì)胞，細(xì)胞系，原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑，重組蛋白，ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測(cè)試劑

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