細胞增殖方法

細胞增殖的定義

細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物，以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細胞生物，以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細 胞，用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細胞。

細胞增殖的檢測方法

1）對活細胞的代謝活性的檢測（基于MTT、CCK-8等）

2）DNA合成的檢測（基于BrdU的免疫法或EdU的點擊化學法），可通過體內(nèi)成像、微孔板或流式細胞術(shù)檢測 等多種技術(shù)進行細胞示蹤。

細胞代謝活性檢測

MTT（噻唑藍）：通過添加四咪唑鹽到細胞中可進行線粒體內(nèi)酶代謝活性的測定。活細胞能將四咪唑鹽（如MTT、XTT、WST-1）還原成藍紫色的甲瓚或甲瓚鹽（Formazan），可通過分光光度計或酶標儀進行檢測。

Cell Counting Kit–8 （CCK-8）中的WST-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng) 基中，生成的甲臜量與活細胞數(shù)量成正比?；贑CK-8（WST-8）的試劑盒能高度準確地檢測細胞增殖，比MTT法 及XTT法的靈敏度高5倍，能檢測更低的細胞數(shù)目。該試劑盒可適用于96孔板培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞。

DNA的合成的檢測

DNA的新組裝合成是細胞生長的必要條件，故經(jīng)常被用來進行細胞增殖、細胞活力及凋亡的檢測。 BrdU及EdU，都是胸腺嘧啶的非放射性類似物，能摻入增殖細胞的DNA中，可通過對BrdU及EdU的檢測，從而對DNA的合 成量進行測定。

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲 入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細胞DNA復(fù)制活性，適用于細 胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。

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